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林瑞庆:猪弓形虫病的检测技术与防控
华南农业大学兽医学院寄生虫教研室主任林瑞庆副研究员接受养猪信息网的采访,就猪的弓形虫病防控和实验室检测技术作了深入的介绍。
林瑞庆:猪弓形虫病的检测技术与防控

当前,我国的养殖模式朝规模化、标准化方向发展,许多病毒、细菌性疾病已得到很好的控制,想要取得更高的经济效益,一些消耗性的、隐性感染的疾病自然不容忽视。

近日,华南农业大学兽医学院寄生虫教研室主任林瑞庆副研究员接受养猪信息网的采访,就猪的弓形虫病防控和实验室检测技术作了深入的介绍。

林瑞庆副研究员

弓形虫病是一种人兽共患的寄生虫病,在猪的感染较为普遍。近两年,教研室调研了近100个猪场,特异PCR结果显示总体样品阳性率为18%,阳性场65%,阴性场35%,也就是说,猪弓形虫病流行较广,但有些场的感染率比较高,有些场为阴性, 其中检测到阳性率最高的一个场达到95%也证明了这一点。

林瑞庆老师表示 ,弓形虫的感染情况跟猪场的管理水平、猪群健康状况是直接相关的,阳性率高的场往往规模较小,管理水平较低,猪群健康状态差。如果猪群生产不稳定,有比例较高的流产、死胎、发热等现象,猪群整体健康情况较差,可以怀疑弓形虫感染,进行下一步检测。

你可以选择以下几种方法进行检测

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弓形虫的实验室检测手段主要有以下几种:

1、涂片染色:简单快捷,但缺点是死后检测,同时需要专业实验室和人员;其次,猪场一般会在猪只发病后(死亡前)已用药,组织里虫体已减少,往往导致检出率较低。

2、动物接种:采集组织,处理后接种动物,盲传几代再诊断,这种方式主要用于分离病原进行下一步科学研究。

3、免疫学方法:免疫学诊断是目前较常用的诊断方法,可检测抗体,也可检测弓形虫循环抗原。常用的方法有酶联免疫吸附试验(ELISA)、间接血凝试验(IHA)、改良凝集试验(MAT)等,理论上,机体感染弓形体后即会产生抗体(过往感染),所以抗体阳性不能判断是否现症感染,对诊断和治疗的指导意义不大,而抗原检测目前可应用的可靠的试剂盒较少。

4、分子生物学:如PCR等,通过诊断病原的特异性序列来确诊,检测的进行需要一定的实验室条件。好的方法敏感性高、特异性强,并对疾病临床防控有指导意义。

华农寄生虫教研室建立了实用性强的特异PCR方法,通过比较筛选获得敏感性高和特异性强的引物,优化条件后应用猪弓形虫病的血液检测。

这种特异PCR方法可检测不同的样品——组织器官、水源、饲料、精液、其它分泌物等,但还是建议使用血液样品。因为就猪的感染过程来说,弓形虫首先在肠道固有层增殖,然后进入血液系统和淋巴系统,再到各个组织器官,这个过程也在一直增殖,是急性感染期,感染动物常出现病症(发热、流产等),造成生产损失。如宿主的抵抗力增强,病原增殖变慢,聚集并在组织器官形成包囊,这是慢性感染过程,动物带虫但表现正常。特异PCR方法通过监测弓形虫在血液中的增殖和散播(感染和发病的过程),克服血清学抗体检测只能证明过往感染的缺点,对生产管理具有重要的指导意义:一方面可以监测病原是否在机体传播,起预警和诊断作用;另一方面可通过检测用药后是否转阴来验证疗效,根据检测结果指导用药。2

 

这些传染源万万不可忽视

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对于弓形虫的防控,林瑞庆老师强调了以下几个关键点:

1、终末宿主:从生活史和感染情况来看,弓形虫可感染两百多种动物,猫科动物是终末宿主,可在猫体内完成生活史,由排出卵囊(中间宿主不排出卵囊)。卵囊对外界不利条件的抵抗力很强,抗酸碱,不能被一般消毒液所杀灭,在外界正常条件下可存活1-2年。现在有些猪场养猫或者环境中存在野猫,导致猪场存在这个重要的传播来源。

2、中间宿主:另外一个传播因素——老鼠,因这个传播媒介比较常见,活动范围广,而且老鼠本身也是中间宿主,可以携带病原四处传播。此外,其它的昆虫或者人类活动等也是病原扩散的因素。

3、感染的动物:已有研究证明,发病动物的体液中可检测到虫体,此外,因为可以垂直传播,感染母畜可通过胎盘将弓形虫传给后代,造成仔猪死亡或者弱仔。

因此,猪场应加强这些环节的防控。

五体统治,是防治方案,也是一种药

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而对于弓形虫病的治疗,林老师表示:不能只针对弓形虫用药,而需要综合考虑。

弓形虫病是机会致病性的疾病,感染后是否发病取决于很多因素,如病原的数量、毒力,而更重要的是宿主的健康状况、免疫情况。往往那些抵抗力差的猪只会混合或继发感染其它病原,如业内常说的“五体”——弓形体、支原体、衣原体、螺旋体、付红细胞体等。所以如果是弓形虫阳性猪群,建议在预防、治疗用药时要考虑到其它病原,综合预防。目前弓形虫防治效果较好的是磺胺药,例如,正典生物推出的“五体统治”(复方磺胺间甲氧嘧啶)是运用微囊缓释技术生产的一个药物,能达到减量增效的效果。此外,配合使用四环素类等药物有助于对其他病原的综合防治,同时补充维生素等加强营养、调整免疫状态,能起到比较好的效果。

林瑞庆老师建议,猪场应定期做寄生虫检测,以掌握猪群的健康状况,制定预防方案。考虑到食品安全、药物残留等问题,现在业内提倡“精准用药”,而“精准用药”(有目的的预防用药、制定科学的用药程序、使用效果好的药物等需要有相应的检测数据来支持。诊断和监测是做到“精准用药”的重要手段。用好药,必须检测先行!4

你可以参加这个培训班,提升技能

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今年8月,华农寄生虫教研室联合佛山正典生物技术有限公司举办了为期3天的的寄生虫检测技术培训班,得到了业内强烈响应。

林瑞庆老师介绍,举办培训班,一方面为让企业认识到寄生虫病的危害,重视寄生虫疾病,学习和掌握相关诊断技术,提高疫病控制能力从而提高养殖效益。另一方面,华农也倡导这种社会服务和科学宣传。而正典生物是致力于寄生虫病产品的研发和生产的企业,在行业中处于领先位置,与华农有长期的产学研合作关系。寄生虫检测技术培训班已举办了数年,每年1-2届,企业和学员的参与热情很高。从报名来看,每期都满员甚至超额。

最初的培训班旨在把寄生虫的基本知识和诊断方法进行应用推广,随着技术的发展和企业需求的变化,培训班在以前的基础上与时俱进,会将实验室最新的研究成果和较成熟的先进技术介绍给学员,目的是提高学员们的诊断能力,回去后能进行独立的操作。

“现在的企业实力都比较雄厚,一般都拥有自己的实验室,缺少的可能就是技术上的学习和提升,这个培训班能让技术骨干掌握相关技术,对整个行业、整个社会都是有好处的,也是我们想要做的事。”林瑞庆老师说。

检测技术朝高精尖发展,但传统技术更要掌握

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评价一个检测方法好不好,主要看它的特异性、敏感性、实用性,是否易操作、结果是否容易判定、对临床防控是否具指导意义等等,任何的检测方法都是围绕这些方面不断改善和进步的。精准、方便、程序化是诊断技术的发展方向。

具体来说,跨学科的的技术结合发展很快,例如计算机科学、影像学应用到寄生虫形态鉴定和分类上,会使该项工作变得更加精准,而不会因为人的肉眼判断,产生个体的差异;此外,还有应用物理化学技术,将免疫学方法与传感器、电流等技术结合,提高检测的敏感性等;分子生物学检测需要特定的仪器设备,若要广泛运用到临床,需提高其实用性,设备的小型便携、操作简单如建立LAMP之类的方法是一大发展方向。

林瑞庆老师最后强调,高精尖的技术在敏感性、特异性、机械化方面有它的优势,我们应该建立和开发,但对于临床技术人员,传统的技术更要学习和掌握,例如猪群拉稀,怀疑寄生虫引起可以先镜检,有可能是小袋纤毛虫等感染。一些有一点技术经验马上就可以判断出来的疾病,没必要将简单的事情复杂化。

 

采访|廖羽萍、温德平

整理|廖羽萍

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